一，簡述

本試驗方法是基于當(dāng)實驗室離心機(jī)操作和試驗時，將吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈暴露在密集的細(xì)菌孢子懸浮液上來觀察是否有細(xì)菌孢子逸出。在按照制造商的說明書和按照處理危險生物材料相關(guān)的良好實驗室習(xí)慣進(jìn)行操作時，設(shè)計本試驗在可能發(fā)生的預(yù)見事件期間，全面考驗密封圈的設(shè)計

二，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

GB 4793.7—2008附錄AA

IEC61010-2-020:2006

三，設(shè)備構(gòu)成

離心機(jī)（客戶自配）；

試驗箱：完全密封功能，排風(fēng)功能，高效過濾功能；

熏蒸功能

四，技術(shù)參數(shù)

控制系統(tǒng)：PLC;

操作界面：彩色7寸威綸通，中英文切換；

試驗箱：2.8 m3/min 速率抽氣的排風(fēng)扇；

懸浮液：枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢（客戶自備）；

無菌瓊脂皿10只；

熏蒸劑客戶自備；

五，操作流程

試驗懸浮液

試驗生物體的孢子的水狀懸浮液即枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢(參見 B.atrophaeus Nakamura 或 B.globigii)含≥1×101° spores/mL。

5.1 試驗皿

裝有適合試驗生物體生長介質(zhì)的無菌瓊脂皿。通過從100 spore/mL～1000   spore/mL 的懸浮液

中取出0. 1 mL, 精度±30%,倒在兩塊瓊脂平板上，在這批瓊脂平板上應(yīng)該能夠培養(yǎng)試驗微生物的低 濃度。

5.2 取樣設(shè)備

對于所有的實驗室離心機(jī)，取樣設(shè)備包括為取樣表面準(zhǔn)備的用無菌水弄濕的無菌棉簽。

5.3 熏蒸設(shè)備

每個單獨(dú)的試驗后，應(yīng)該對設(shè)備的試驗箱及其內(nèi)部進(jìn)行適當(dāng)熏蒸，從而殺死試驗懸浮液殘留的孢 子。在試驗前通過確保轉(zhuǎn)頭或試驗箱沒有背景污染來驗證熏蒸的效果。應(yīng)該注意保證在試驗進(jìn)行前熏 蒸劑充分揮發(fā)。試驗箱的通風(fēng)系統(tǒng)是關(guān)閉的，經(jīng)過與試驗時間相同的時間之后，測量熏蒸劑的濃度。如 果熏蒸劑的濃度可測得(在23℃甲醛>2.44 mg/m3 的情況下),則要推遲進(jìn)行試驗，并繼續(xù)通風(fēng)，直到

濃度下降為止。

注：吸人熏蒸劑是有毒的，應(yīng)該注意避免人員暴露在蒸汽中，并且在蒸汽的后續(xù)處理中也應(yīng)避免人員暴露。

5.4樣品評價

在試驗皿表面培養(yǎng)所有的菌種。用棉簽擦拭試驗皿表面，將該試驗皿在37℃下進(jìn)行18 h～24 h 的有氧細(xì)菌培養(yǎng)。通過橙黃色來辨認(rèn)枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢菌落，以菌落形成的單位進(jìn)行記錄。

5.5試驗規(guī)程

AA.5.1  試驗懸浮液的檢查

每次試驗之前，將試驗懸浮液的適當(dāng)稀釋物涂在試驗皿上，立即進(jìn)行試驗。

AA.5.2  試驗方法

AA.5.2.1  試驗次數(shù)

對每個吊籃或轉(zhuǎn)頭進(jìn)行三次獨(dú)立的試驗，每次獨(dú)立的試驗都要對吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈進(jìn)行試驗。 試驗前要按照規(guī)定進(jìn)行對照樣品的取樣。

AA.5.2.2   固定角度的轉(zhuǎn)頭試驗方法

將試驗懸浮液裝入受試轉(zhuǎn)頭的容器內(nèi)，不加蓋或不密封地放置在轉(zhuǎn)頭的每個位置。按照制造商的 使用說明書，將所有轉(zhuǎn)頭位置上的容器達(dá)到其額定容量。

用吸管把另外的試驗懸浮液小心滴入轉(zhuǎn)頭中間，以模擬一個“灑落”。如果可能，在沒有溢出轉(zhuǎn)頭的 情況下，“灑落”量應(yīng)該等于或大于上限為5 mL 的一個容器的容量，或者對于具有較大容量容器的轉(zhuǎn) 頭，灑落量應(yīng)該是5 mL 或一個容器容量的10%,取其較大者。如果使用量小于用來模擬“灑落”試驗 懸浮液的滿容量，則必須做記錄。

如果使用過濾器作為斜角式轉(zhuǎn)頭的主要防護(hù)模式，那么使用的吊籃密封試驗方法。

AA.5.2.3   吊籃密封方法

對于密封的吊籃和過濾器，需要一種不同的試驗方法。吊籃按其額定容量裝有試驗懸浮液。蓋上 蓋子以后，吊籃緩慢倒置兩次，以使試驗懸浮液落在吊籃封口內(nèi)側(cè)上。

注：由于吊籃和轉(zhuǎn)頭有多種設(shè)計，上述試驗方法也許不太適合所有的設(shè)計。在這些情況下可能需要開發(fā)其他方法 以達(dá)到同樣的效果，例如按照制造商的說明書考驗使用的密封圈。

AA.5.2.4  對照樣品

每次試驗之前進(jìn)行表面取樣來測量試驗微生物的背景污染。首先，在O型密封圈內(nèi)側(cè)進(jìn)行表面取 樣。在試驗懸浮液裝入吊籃或轉(zhuǎn)頭以后，在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈的整個外側(cè)進(jìn)行表面取樣，并在離心腔 內(nèi)側(cè)周邊的多個點(diǎn)進(jìn)行表面取樣，其高度是實驗室離心機(jī)正在運(yùn)行時的吊籃或轉(zhuǎn)頭密封圈的高度。當(dāng) 試驗一個密封的吊籃時，從轉(zhuǎn)頭的表面取樣。對于密封的吊籃或過濾器，在吊籃倒置以后，用棉簽對封 口進(jìn)行附加的取樣。也可在有潛在污染的地方用棉簽取樣。

AA.5.2.5  離心

在取得對照樣品之后 加速到實驗室離心機(jī)受試旋轉(zhuǎn)組件的最大轉(zhuǎn)速，并在該轉(zhuǎn)速 保持5 min, 然后減速到停。

實驗室離心機(jī)停止后，打開機(jī)蓋，用棉簽從對照樣品的取樣部位取樣

AA.5.2.6  消毒

每次試驗之后，對試驗箱及其內(nèi)部通過熏蒸進(jìn)行消毒，對試驗箱用排風(fēng)扇徹底通風(fēng)。 對受試吊籃或轉(zhuǎn)頭按照制造商推薦的方法進(jìn)行消毒。

5.6合格與不合格的標(biāo)準(zhǔn)

對每個轉(zhuǎn)頭或吊籃進(jìn)行三次獨(dú)立的、有效的試驗。每次獨(dú)立的試驗都通過，才能算作合格，其中任 意一個單獨(dú)的有效試驗不通過都會導(dǎo)致整體不合格。

只有在下述兩種情況之一時試驗才有效，加入最大量的附加試驗懸浮液，或 者如果離心后立即從密封圈內(nèi)取出菌落形成單位>1×103 的樣本，在同一位置的該樣品的菌落形成單 位大于對照樣品。

對于三個單獨(dú)的試驗，離心作用后，通過擦拭回收的(在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈內(nèi)的除外)菌落形成單 位的數(shù)量不得超出在試驗前收集的對照樣品中回收數(shù)量1個菌落形成單位(在數(shù)量非常低時，允許采樣 誤差)。如果在任何對照樣品中檢測到超過5個菌落形成單位的數(shù)量，那么該試驗是無效的，應(yīng)該重新 進(jìn)行試驗。